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食用菌母種制作

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食用菌母種制作

發布日期:2016-10-20 作者: 點擊:

  一、目的要求
了解食用菌母種培養基的配方,熟悉母種培養基(PDA或PSA)的配制方法,了解高壓蒸汽滅菌鍋的構造,掌握正確使用高壓蒸汽滅鍋的方法.熟悉接種箱的消毒滅菌方法,掌握食用菌母種轉管技術。
二、實訓準備
(1)配制培養基材料:馬鈴薯,葡萄糖(或蔗糖)、瓊脂、水等。
(2)儀器用具:高壓蒸汽滅菌鍋(手提式或立式),可調式電爐,鋁鍋(20cm),湯勺,切刀,切板,量杯,紗布,漏斗(帶膠管和玻璃管),止水夾,漏斗架,試管(18mm×180mm或20mm×200mm),1cm厚的長方形木條(擺放斜面時墊試管用),棉花(未脫脂),捆扎繩,標簽,天平等。
(3)消毒滅菌藥品及設備:高錳酸鉀,37%甲醛溶液,坩堝或燒杯,紫外燈,0.25%新潔爾滅溶液,5%石炭酸溶液,噴霧器等。
(4)轉管材料及用具:平菇試管母各,接種箱,接種鏟,酒精燈,火柴,95%酒精,75%酒精棉球,肥皂等。
三,方法步驟
(1)母種培養基(PDA或PSA)配方:馬鈴薯200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,瓊脂15~20g,水1000ml,PH自然。
(2)母種培養基的配制
熬制:先將馬鈴薯洗凈,挖芽去皮,準確稱取200g,然后將馬鈴薯切成玉米大小的顆粒或薄片。用量杯量取1000~1200ml水于鋁鍋內煮馬鈴薯,待水沸后計時20~25min,當馬鈴薯酥而不爛時,用雙層紗布進行過濾于量杯中,洗凈鋁鍋濾渣,將濾液到回鍋中繼續以文火加熱,加入葡萄糖(或蔗糖)和瓊脂,待瓊脂溶化,不斷攪拌,以免糊鍋,注意補足水量。
分裝:將熬成的培養基保持文火,趁熱分裝:用勺將培養基加入漏斗中,左手握2~5支試管,右手持漏斗下面的玻璃管入試管口內,同時放開止水夾,讓培養基逐個流入試管內,培養基高度約為試管長度的1/6~1/5,約10~15ml,注意避免將培養基沾于試管口內外。分裝后的試管,在培養基凝固前必須立放。 制棉塞:用疊放式將未脫脂棉做成棉球,塞入試管口,管口內棉塞底部要求光滑,棉塞側面要求無褶皺,棉塞長度的2/3在管口內,1/3在管口外。棉塞的松緊以手提棉塞輕晃試管不滑出為度,捆把:以10支試管為一捆,用捆扎繩扎緊。貼上標簽,準備滅菌。
(3)培養基的滅菌
手提式高壓滅菌鍋的構造:鍋體,提把,壓力表,安全閥,排氣閥,滅菌鍋腔,篩架,鍋蓋,膠墊圈,緊固螺栓等。 高壓滅菌鍋的使用方法:加水→滅菌物入鍋→上蓋→對稱,均勻地扭緊螺栓→加熱升溫→壓力至0.5kg/cm2時,打開排氣閥排除鍋內冷空氣,壓力降至0,溫度達到121℃時,開始調火穩壓25~30min→滅火,自然降壓到壓力為0.5kg/cm2,可慢慢批開排氣閥徐徐降壓至0(若降壓太快,試管中的培養基易沸騰浸濕棉塞)→鍋蓋半開,讓鍋內多余蒸汽逸出,鍋內的余熱烘干棉塞→開蓋,取物→擺斜面→斜面試管上應覆蓋潔凈的厚毛巾或幾層紗布,防止試管內產生過多的冷凝水。 接種箱的消毒滅菌藥物消毒:首先用0.25%新潔爾滅溶液擦凈接種箱內外.再用5%石炭酸溶液進行接種箱內的噴霧。 熏蒸殺菌:在坩堝或燒杯里倒放37%甲醛溶液10ml/m3,放進接種箱內,再通過接種箱的側門在甲醛溶液加入高錳酸鉀5~8g.甲醛溶液與高錳酸鉀發生強烈的氧化還原反應,立即沸騰并揮發出有強烈刺激的氣體,其中產生的原子氧有較強的殺菌作用。 紫外線燈照射:接種箱的頂部安裝一根30~40W紫外燈,在接種箱玻璃外面覆蓋一層牛皮紙或幾層報紙有機木耳,壓縮秋木耳,食用菌廠家,黑暗中開燈照射才能才能增加殺菌效果,紫外燈照射1h后關燈,待臭氧散后可開始接種。
(4)食用菌母種轉管技術
手及試管的表面消毒:先用肥皂洗手,在用0.25%新潔爾滅溶液浸泡手2min,或以75%酒精棉球擦手和試管表面(包括母種試管和待接種的斜面試管)。在接種箱外的酒精燈的火焰上燃燒試管外的棉塞,即用手捂滅火焰,立即將試管放入接種箱內。
菌種移接(轉管)方法:兩手從接種孔伸入接種箱內,左手持母種管和斜面管并排于拇指和食指間,拇指在上,食指在下。注意兩支試管口對齊于火焰上方,右手持接種鏟,用手背指縫拔掉試管棉塞,使棉塞底部朝外,將接種鏟先蘸取95%酒精,后在火焰中燒灼接種鏟的前段,待冷卻后伸入母管內切取一小塊帶有培養基的菌種塊,迅速移入斜面培養基的中部,菌絲朝上。然后,將右手指縫夾住的棉塞底部及周圍在火焰上燒一下,立即塞入試管口,旋緊棉塞。再換上第二支斜面試管,重復如上操作,注意,菌種移接的整個過程的動作要求做到"快","準",接種鏟不要觸碰管口及管壁。接種后的試管應立即巾標簽,寫上菌號及日期,進行適溫培養。 結束工作:菌種移接完畢,將酒精燈蓋滅,95%酒精瓶蓋上,然后,批開側門,取出試管,將接種箱的汽水擦干,清除箱內的殘留物,將酒精燈,酒精瓶,接種鏟等用具擺放整齊。


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